Our objective was to describe the most suitable method of corneal tissue preparation and preservation under tissue eye bank conditions. In cases when the corneal lamella is created elsewhere than in the clean room, such as in the operating room, terminal sterillisation is required by law. A promising possible method of terminal sterilisation seems to be gamma irradiation[16]. Te impact of sterilisation by gamma-irradiation on the stromal corneal lamellae has to be further validated. Our plan is to analyse and compare possible methods of corneal stromal tissue creation and storage, which would lead to implementation of a new product in the tissue eye bank. Tis would provide a suitable donor corneal tissue tailored to patients ‘ needs while reducing the amount of wasted donor corneal tissue. In our project, we would also like to build an optimal process to be able to prepare a lenticule after obtaining a lamella for DMEK transplant from donor cornea. Tis would improve the efciency of corneal tissue utilisation and increase the number of patients who would beneft from corneal lenticule implantation. Methods Used tissues Human corneas were obtained according to the Declaration of Helsinki using the standard protocol of the Tissue Eye Bank of University Hospital Kralovske Vinohrady. We used tissues which were not suitable for transplantation due to low endothelial density, reactive serology or peripheral scarring after cataract surgery. In light of our goal, we also used corneas after previous removal of the endothelium for posterior lamellar keratoplasty which was performed at our clinic. Tested corneas were obtained from donors with an average age of 68 ± 7 years, predominantly from women (59%). Tree corneas had previously undergone a cataract surgery, but the endothelial cell count was sufcient and there was no signifcant scarring. Te average endothelial cell count was 2543 ± 319 cells/mm2. After deepitalisation, we made one cut of the donor cornea at the depth of 200um, which created an anterior lamella containing Bowmans membrane of the thickness of approximately 200 um and posterior lamella with the average thickness of 400um. Tis made it possible to produce comparable samples for further processing. For the comparison of two diferent methods of stromal lamellae preparation we used paired corneas from one donor, one of them was cut with microkeratome and the other with femtosecond laser. Te same approach was used for the analysis of the corneal lamella which was not irradiated before the preservation in comparison to the irradiated one. Tis minimised the bias depending on possible diferent donor cornea characteristics.

Nuestro objetivo fue describir los más adecuados método de preparación y conservación del tejido corneal en condiciones de banco de ojos de tejidos. En los casos en que la laminilla corneal se crea en otro lugar que no sea la sala limpia, como en el quirófano, la esterilización terminal es requerido por la ley. Un posible método prometedor de esterilización terminal parece ser la irradiación gamma[16]. te Es necesario validar aún más el impacto de la esterilización por irradiación gamma en las laminillas estromales de la córnea. Nuestro plan es analizar y comparar posibles métodos. de creación y almacenamiento de tejido estromal corneal, que llevaría a la implementación de un nuevo producto en el banco de ojos de tejidos. Esto proporcionaría un tejido corneal donante adecuado adaptado a las necesidades de los pacientes y al mismo tiempo reduciría el cantidad de tejido corneal donado desperdiciado. En nuestro proyecto también nos gustaría construir una óptima proceso para poder preparar una lentícula luego de la obtención una laminilla para trasplante DMEK de córnea de donante. esto mejoraría la eficiencia de la utilización del tejido corneal y aumentar el número de pacientes que se beneficiarían por implantación de lentículos corneales. Métodos pañuelos usados Las córneas humanas se obtuvieron de acuerdo con la Declaración de Helsinki utilizando el protocolo estándar del Banco de Tejidos Oculares del Hospital Universitario Kralovske Vinohrady.Utilizamos tejidos que no eran aptos para trasplante debido a baja densidad endotelial, serología reactiva o Cicatrización periférica después de la cirugía de cataratas. A la luz de nuestra objetivo, también utilizamos córneas previa extirpación de la endotelio para la queratoplastia lamelar posterior que se realizó en nuestra clínica. Las córneas analizadas se obtuvieron de donantes con una edad promedio de 68 ± 7 años, predominantemente de mujeres (59%). Las córneas de los árboles habían sido sometidas previamente a una cirugía de cataratas, pero el recuento de células endoteliales era suficiente y no había cicatrices significativas. el promedio el recuento de células endoteliales fue de 2.543 ± 319 células/mm2. Después de la deepitalización, hicimos un corte del donante. córnea a una profundidad de 200um, lo que creó una zona anterior lámina que contiene membrana de Bowman del espesor de aproximadamente 200 um y laminilla posterior con el espesor promedio de 400um. Esto hizo posible producir muestras comparables para su posterior procesamiento. Para la comparación de dos métodos diferentes de preparación de laminillas estromales utilizamos córneas pareadas de En un donante, a uno de ellos se le cortó con microqueratomo y el otro con láser de femtosegundo. El mismo enfoque se utilizó para el análisis de la laminilla corneal que no fue irradiado antes de la conservación en comparación al irradiado. Esto minimiza el sesgo dependiendo sobre posibles diferentes características de la córnea del donante.